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中國成年病人手術后的肺癌組織

5×105cells/T25培養瓶

貼壁

HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌檢測陰性。

1、中央型：腫瘤發生在段以上的支氣管，即發生在葉支氣管及段支氣管。 2、周圍型：腫瘤發生在段以下支氣管。 3、彌溫型：腫瘤發生在細支氣管或肺泡，彌漫分布于兩肺。

按世界衛生組織（WHO，1981）提出的標準分型如下： 1、鱗狀細胞癌：簡稱鱗癌，包括梭形細胞（鱗）癌； 2、腺癌：包括管狀腺癌、乳頭狀腺癌、細支氣管癌、肺泡細胞癌； 3、腺鱗癌； 4、未分化癌：分為小細胞癌（包括燕麥細胞型、中間細胞型、復合燕麥細胞型）和大細胞 癌（包括巨細胞、透明細胞癌）； 5、類癌（肺內分泌腫瘤）； 6、支氣管腺癌（包括腺樣囊性癌、粘液表皮樣癌、腺泡細胞癌）；

0 期：原位癌 Ia：T1NoMo Ib：T2NoMo IIa：T1N1Mo IIb：T2N1Mo T3NoMo IIIa：T3N1Mo T1N2Mo T2N2Mo T3N2Mo IIIb：T4NoMo T4N1Mo T4N2Mo T1N3Mo T2N3Mo T3N3Mo T1N2Mo IV：任何T、任何N、M1

如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面T25瓶為例； 1．細胞凍存時，棄去培養基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，細胞變圓脫落后，加入2ml完全培養基終止消化，可使用血球計數板計數。 2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數目大于1X106個細胞凍存。3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。