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中國成年病人手術(shù)后的肝癌組織

5×105cells/T25培養(yǎng)瓶

貼壁

HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測陰性。

1.彌漫型表現(xiàn)為均勻散在微小結(jié)節(jié)，分布于整個(gè)肝臟，結(jié)節(jié)大小較一致，一般不超過肝小 葉的大小，幾乎總是和肝硬化同時(shí)存在，肝臟正常或略小，與肝硬化不易區(qū)別，是較少見的 一型，約占原發(fā)性肝癌的5%，發(fā)展快，預(yù)后差。 2.塊狀型可分為單純塊狀型、融合塊狀型及多塊狀型。單純塊狀型，癌腫為單個(gè)腫塊，邊 界清楚或不規(guī)則，常有完整或不完整包膜，有的可無包膜，腫塊邊緣常可見小的衛(wèi)星癌結(jié)節(jié)。 融合塊狀型，可見以癌塊為中心向周圍呈浸潤性生長，并與鄰近之大小癌結(jié)節(jié)。多塊狀型為 兩個(gè)以上的單塊或融合塊，本型約占原發(fā)性肝癌的30%，因多伴有肝硬化，預(yù)后較好。 3.結(jié)節(jié)型腫瘤為多數(shù)大小不等的結(jié)節(jié)，突出在肝臟表現(xiàn)，遍及全肝，多并發(fā)肝硬化。腫瘤 結(jié)節(jié)呈灰白色或灰黃色，也可呈棕紅色。本型可分為單結(jié)節(jié)型、融合結(jié)節(jié)型及多結(jié)節(jié)型。本 型約占全部肝癌的2/3，預(yù)后較差。 4.小癌型指癌腫直徑在5cm 以下（有人認(rèn)為在3cm 以下），且為單個(gè)存在，一般有完整的 包膜，惡性程度低，基本上是早期肝癌。手術(shù)切除率高，預(yù)后好。

肝細(xì)胞癌 膽管細(xì)胞癌 混合型肝癌 纖維板層型肝癌

如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例； 1．細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入2ml完全培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。 2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。