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正常人食管組織

5×105cells/T25培養瓶

貼壁

上皮細胞樣

M199培養基，含FBS、上皮細胞生長添加劑、Hydrocortisone、Insulin、Transferrin、Epinephrine、Penicillin、Streptomycin等 建議購買原代食管上皮細胞專用培養基

HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌檢測陰性。

（1） 反流性食管炎。 （2） 食管狹窄。 （3） 食管癌。

如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

食管是咽和胃之間的消化管，哺乳動物的食管結構上由內向外分四層:黏膜層、黏膜下層、肌層、外膜。其中上皮細胞主要在黏膜層，其上皮為較厚的未角化的復層扁平上皮，耐摩擦，有保護作用。在發育過程中，食管的上皮細胞增殖，由單層變為復層，使管腔變狹窄，甚至一度閉鎖，以后管腔又重新出現。在食管與胃賁門交界處，復層扁平上皮突然變成單層柱狀上皮。 食管損傷、從而導致食管長期的慢性炎癥、潰瘍，或慢性刺激，進而食管上皮增生，最后導致癌變。實驗證明，彌漫性或局灶性上皮增生可能是食管癌的癌前期病變。在食管癌的發生中，上皮-間質轉化( EMT)是上皮細胞來源的惡性腫瘤細胞獲得遷移和侵襲能力的重要生物學過程，有利于腫瘤轉移。細胞鑒定：廣譜角蛋白（PCK）免疫熒光染色為陽性。

待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面T25瓶為例； 1．細胞凍存時，棄去培養基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，細胞變圓脫落后，加入2ml完全培養基終止消化，可使用血球計數板計數。 2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數目大于1X106個細胞凍存。3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

（1） 食管上皮細胞頂端細胞膜和細胞間連接復合體聯合在一起產生有效滲透屏障， 防止食管內容物滲入。 （2） 食管上皮細胞使表層細胞的基質外側細胞膜和深層細胞的全部細胞膜均不暴露 于食管腔內規律的大幅波動的滲透壓之下。 （3） 食管上皮基底層的細胞可增殖并向食管腔移行。