特征特性
哮喘是一種常見的氣道慢性炎癥性疾病，目前我國有約2000萬人罹患哮喘。近些年，由于霧霾等空氣質(zhì)量與環(huán)境污染程度的日益惡劣，呼吸系統(tǒng)疾病也逐漸成為了全世界范圍影響人類健康最嚴(yán)重的慢性疾病之一。據(jù)世界衛(wèi)生組織預(yù)測，到2025年，世界上將會有 4 億人患上哮喘。哮喘發(fā) 病 癥 狀 眾 多，早 期 表 現(xiàn) 為 過 敏 性 炎癥，后期由于氣管平滑肌增生，阻塞氣管，導(dǎo)致氣道狹窄、氣道高反應(yīng)及氣道重塑，患者出現(xiàn)胸悶、氣喘等癥狀，嚴(yán)重時(shí)危及生命。因此，對哮喘的發(fā)病機(jī)理與治療的研究是至關(guān)重要的。在對哮喘發(fā)病機(jī)制的研究中，氣管平滑肌是針對氣道阻塞性癥狀的主要研究目標(biāo)之一，針對氣管平滑肌細(xì)胞的形態(tài)學(xué)觀察與細(xì)胞增殖速率的測量是在細(xì)胞生物學(xué)水平研究哮喘發(fā)病機(jī)制的常用手段。
細(xì)胞凍存步驟
待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例； 1．細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入2ml完全培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。 2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標(biāo)識。明舟生物按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
