最新中文字幕-精品国产99-国产精品福利在线观看-粉嫩av一区二区三区-日韩精品久久久久-美丽的姑娘国语视频-亚洲欧洲色-国产不卡毛片-三级黄毛片-免费福利在线-日韩av三区-欧美成年人网站-欧洲美女与动交ccoo-成人涩涩软件-秋霞影院午夜老牛影院-婷婷久久伊人-呦呦视频在线观看-www.天天综合-日韩精品高清视频-国产欧美综合在线-欧美日韩一区二区三区在线视频-a猛片免费播放-91九色蝌蚪国产-国产欧美日韩专区-嫩模被强到高潮呻吟不断

1*10^6

乳腺；浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌

女；74歲

HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)陰性。

MCM-0324：BT-20細(xì)胞專(zhuān)用培養(yǎng)基

上皮細(xì)胞樣

1：2~1:4 倍增時(shí)間：70h

干冰運(yùn)輸(2ml凍存管)或活細(xì)胞運(yùn)輸（T25細(xì)胞瓶）

Freeze medium: 50% basal medium+40% FBS+10%.DMSOStorage temperature: liquid nitrogen vapor phase

貼壁

BT-20細(xì)胞是由E:Y:Lasfargues和L-Ozzello于1958年建系,源自-位74歲白人女性的乳腺癌組織。BT-20細(xì)胞表達(dá)WNT3和WNT78 ; TNF-a抑制BT-20細(xì)胞生長(zhǎng)。BT-20細(xì)胞雌激素受體陰性,但表達(dá)5'-外顯子缺失的雌激素mRNA。

如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例；1．細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入2ml完全培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。