F-ompT hsdSB (rB-mB-) gal dcm rne131 (DE3)pLysS (CamR)
基本信息
BL21 Star (DE3)pLysS菌株來源于BL21 (DE3)，含有rne131突變(RNaseE基因突變)，RNaseE基因的突變降低了內(nèi)源RNase的積累，增強(qiáng)了菌株細(xì)胞內(nèi)mRNA的穩(wěn)定性，從而提高了異源蛋白的表達(dá)水平。 BL21(DE3)是BL21被λ噬菌體DE3溶原化(lysogenization)的衍生菌株，在lacUV5啟動(dòng)子控制下可表達(dá)噬菌體T7 RNA聚合酶(相關(guān)基因序列已經(jīng)整合到細(xì)菌染色體中)。IPTG可以誘導(dǎo)BL21(DE3)菌株中T7 RNA聚合酶的高表達(dá)，因此BL21(DE3)菌株適合受T7啟動(dòng)子(T7 promoter)調(diào)控的目的基因通過IPTG誘導(dǎo)表達(dá)。常見的pET系列原核表達(dá)載體中目的基因的表達(dá)都是受T7啟動(dòng)子調(diào)控的，因此都適合用BL21(DE3)作為宿主菌。 BL21 Star (DE3)pLysS菌株在BL21(DE3)基礎(chǔ)上改造而成，主要適用于T7啟動(dòng)子表達(dá)載體(如pET系列)的高水平蛋白表達(dá)，同時(shí)含有大腸桿菌RNA聚合酶。 BL21(DE3)pLysS菌株攜帶pLysS，具有氯霉素抗性，可以表達(dá)能抑制T7 RNA聚合酶的T7溶菌酶(T7 lysozyme)，從而可以抑制T7 RNA聚合酶在目的蛋白被IPTG誘導(dǎo)前的本底表達(dá)，即導(dǎo)致本底性的外源重組蛋白的表達(dá)被有效抑制。這種情況下特別適合于影響細(xì)胞生存和活力的外源毒性蛋白的表達(dá)。
培養(yǎng)基
KDM158：LB瓊脂
KDM157：營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基Nutrient Agar Medium
菌株簡介
BL21 Star (DE3)pLysS菌株與BL21(DE3)pLysS相比，含有rne131突變(RNaseE基因突變)，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)RNaseE缺少，細(xì)胞內(nèi)mRNA穩(wěn)定性提高，從而可以實(shí)現(xiàn)異源蛋白的高表達(dá)。BL21 Star (DE3)pLysS菌株主要適用于T7啟動(dòng)子表達(dá)載體(如pET系列)的高水平蛋白表達(dá)，同時(shí)含有大腸桿菌RNA聚合酶，也可用于非T7啟動(dòng)子表達(dá)載體(pGEX、pMAL等)的蛋白表達(dá)。由于BL21 Star (DE3)菌株的異源基因基礎(chǔ)表達(dá)水平較高，所以不適合毒性蛋白的表達(dá)。BL21 Star (DE3)pLysS菌株攜帶pLysS，具有氯霉素抗性。pLysS含有表達(dá)T7溶菌酶的基因，T7溶菌酶可與T7 RNA聚合酶結(jié)合抑制其轉(zhuǎn)錄活性，進(jìn)而降低目的基因的背景表達(dá)水平，但不干擾IPTG誘導(dǎo)的蛋白表達(dá)。pLysS質(zhì)粒含有p15A復(fù)制起始子，可以和含有pUC或pBR322等復(fù)制起始子的質(zhì)粒兼容。本菌株可以使用常規(guī)的2YT或LB培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。
