特征特性
人前列腺癌細(xì)胞LNCaP克隆FGC是從一位50歲白人男性(血型B+)的左鎖骨淋巴結(jié)針刺活檢中分離，該患者經(jīng)確診為前列腺癌轉(zhuǎn)移。 這株細(xì)胞對(duì)5-α-二氫睪酮(生長(zhǎng)調(diào)節(jié)子和酸性磷酸脂酶產(chǎn)物)有響應(yīng)。 這株細(xì)胞并不形成一致的單層，而是形成集落，在傳代時(shí)可以用滴管反復(fù)吹吸打碎。 它們僅僅輕輕地吸附在基底上，不形成匯合，很快使培養(yǎng)基變酸。 生長(zhǎng)很慢。 傳代后48小時(shí)內(nèi)不應(yīng)擾動(dòng)。 當(dāng)培養(yǎng)瓶封包后，多數(shù)細(xì)胞從培養(yǎng)瓶底分離，懸浮在培養(yǎng)基中。 收到后，在通常培養(yǎng)單層細(xì)胞的條件下培養(yǎng)24到48小時(shí)，以合細(xì)胞再貼壁。 此后可以換上新鮮培養(yǎng)液。 如果需要，培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)容物可以收集，300g離心15分鐘，以10毫升培養(yǎng)液重懸并培養(yǎng)到一個(gè)單獨(dú)的培養(yǎng)瓶中。請(qǐng)使用Corning的Cellbind培養(yǎng)瓶培養(yǎng)。
細(xì)胞凍存步驟
待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例； 1．細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入2ml完全培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。 2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。明舟生物按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
