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人前列腺上皮細胞

T25

MCM-0200：RWPE-1細胞專用培養基

前列腺上皮；HPV18轉化；男性

上皮細胞

HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌檢測陰性。

腫瘤抑制基因： p53 + [PubMed: 9214605] pRB + [PubMed: 9214605] 一位正常男性前列腺組織切片的周圍區域的上皮細胞用單拷貝的人乳頭瘤病毒的18(HPV-18)進行轉化，建立了RWPE-1 (ATCC CRL-11609) 細胞株 [PubMed: 9214605]. 在三維Matrigel培養時，在雄激素作用下，RWPE-1細胞形成腺胞并向培養基中分泌PSA。[PubMed: 11170142]. 當與Matrigel或基質細胞混合注射雄性裸鼠時，RWPE-1細胞也能形成腺胞[PubMed: 11304724] 并產生PSA。 來源于RWPE-1的細胞再用Kirstin鼠類腫瘤病毒轉染Ki-ras基因，建立了能成瘤的RWPE-2細胞株(ATCC CRL-11610) [PubMed: 9214605] 和 RWPE2-W99 (ATCC CRL-2853) 細胞株。 另外，用N-甲醇-N-硝基脲(MNU)處理RWPE-1，建立了一系列模擬前列腺癌進程中不同時期的成瘤細胞株。 它們是 WPE1-NA22 (ATCC CRL-2849), WPE1-NB14 (ATCC CRL-2850, WPE1-NB11 (ATCC CRL-2851) 和 WPE1-NB26 (ATCC CRL-2852) 細胞株。 據提供者報道，RWPE-1 細胞株(ATCC CRL-11609)經過檢測，乙肝、丙肝、人免疫缺陷病毒都呈陰性。

基本培養基作為Invitrogen (GIBCO)提供的kit的部分： 角化細胞無血清培養基K-SFM，kit目錄號17005-042。隨kit提供這株細胞生長所需的兩種添加劑（牛垂體提取物BPE及人重組表皮生長因子EGF）。 配制完全生長培養基，需添加以下成分： 0.05 mg/ml BPE – 隨K-SFM提供 5 ng/ml EGF -隨K-SFM提供。 注意： 不要過濾完全培養基。 氣相： 空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度： 37.0°C。或者KM專用培養基

1:3傳代,2-3天傳一代。

貼壁生長

無血清細胞凍存液

如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面T25瓶為例；1．細胞凍存時，棄去培養基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，細胞變圓脫落后，加入2ml完全培養基終止消化，可使用血球計數板計數。2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數目大于1X106個細胞凍存。3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。