雙鏈 RNA（dsRNA）是綠色 RNA 農(nóng)藥核心原料，化學(xué)合成、體外轉(zhuǎn)錄成本高昂，微生物工程菌發(fā)酵是低成本規(guī)?；髁髀肪€，現(xiàn)有多類(lèi)底盤(pán)菌株與系統(tǒng)改造策略。

一、主流底盤(pán)菌株

1. 大腸桿菌：遺傳工具完善，經(jīng)典 HT115 (DE3) 敲除 rnc/rnd/rne 降解酶；BL21 (DE3)Δrnc 產(chǎn)量更高，適配實(shí)驗(yàn)室小規(guī)模制備。

2. 谷氨酸棒桿菌：工業(yè)化潛力最強(qiáng)，搭配高拷貝 T7 載體、U1A 保護(hù)蛋白，0.3L 發(fā)酵罐 dsRNA 可達(dá) 1.0 g/L，可合成長(zhǎng)片段 dsRNA。

3. 其他底盤(pán)：蘇云金芽孢桿菌依托產(chǎn)孢強(qiáng)啟動(dòng)子，發(fā)酵后期菌體自溶簡(jiǎn)化提取；丁香假單胞菌借助 φ6 噬菌體 RdRp 酶合成超長(zhǎng) dsRNA；酵母、昆蟲(chóng)共生菌適用于特殊遞送場(chǎng)景，但產(chǎn)量偏低。

二、核心菌株改造技術(shù)

1. 宿主基因組編輯：敲除 rnc、rnt1 等 RNA 降解基因，缺失 endA、recA 提升質(zhì)粒穩(wěn)定性。

2. 表達(dá)載體優(yōu)化：采用雙向啟動(dòng)子 / 發(fā)夾環(huán)兩種轉(zhuǎn)錄框架；選用 T7、ProD 強(qiáng)啟動(dòng)子，串聯(lián)高效終止子；提升質(zhì)?？截悢?shù)。

3. 產(chǎn)物保護(hù)改造：共表達(dá) U1A、TriMV P1 等 RNA 結(jié)合蛋白，減少胞內(nèi)降解。

4. 發(fā)酵調(diào)控改造：優(yōu)化誘導(dǎo)體系（乳糖替代 IPTG、光控 / 溫控啟動(dòng)子），平衡菌體量與 dsRNA 積累峰值。

三、現(xiàn)存問(wèn)題與展望

當(dāng)前多數(shù)菌株產(chǎn)量仍難滿足大規(guī)模農(nóng)藥需求，后續(xù)可通過(guò)代謝重分配、適應(yīng)性進(jìn)化、基因組精簡(jiǎn)改造，進(jìn)一步降低 dsRNA 生產(chǎn)成本，推動(dòng) RNA 農(nóng)藥產(chǎn)業(yè)化。

文獻(xiàn)來(lái)源：

崔錦程,崔潔,卞小瑩. 生產(chǎn)雙鏈RNA工程菌的研究進(jìn)展[J]. 生物工程學(xué)報(bào), 2025, 41(2): 546-558

原文鏈接：https://cjb.ijournals.cn/cjbcn/article/abstract/05240571